流動相與固定相均為液體，且兩者互不相溶，以保證溶質能夠在兩相之間進行有效的分配。高效液相色譜的基本原理是溶質在固定相（cs）和流動相（cm）之間的分配平衡，該平衡遵循如下公式：\[ K = \frac{cs}{cm} = \frac{Vs}{Vm} \]其中，K 是分配系數，Vs 是固定相的體積，Vm 是流動相的體積。在高效液相色譜中，組分的保留順序主要取決于K值，K值大的組分保留時間長。與氣相色譜（GPC）相比，高效液相色譜（HPLC）在流動相對K值的影響上更為顯著。高效液相色譜，亦稱高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜或近代柱色譜，是色譜技術的一個重要分支。該技術采用高壓輸液系統，以不同極性的單一溶劑或混合溶劑、緩沖液等作為流動相，通過色譜柱中的固定相進行分離，隨后進入檢測器進行檢測，實現對樣品成分的分析。高效液相色譜法在化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等多個學科領域發揮著至關重要的作用。根據固定相的性質，高效液相色譜可以分為多種類型，包括高效凝膠色譜、疏水性高效液相色譜、反相高效液相色譜、高效離子交換液相色譜、高效親和液相色譜以及高效聚焦液相色譜等。不同類型的高效液相色譜用于分離或分析化合物的原理與相應的普通液相層析原理相似，但高效液相色譜具有更高的靈敏度、速度、分辨率和重復性，并且必須在色譜儀中進行。