1.G-C含量。G-C對(duì)包含三個(gè)氫鍵，A-T對(duì)包含兩個(gè)氫鍵。因此，G-C對(duì)的相對(duì)含量越高，TM越高(圖3-29)。在0.15mol/lnacl、0.015mol/l檸檬酸鈉溶液(1×在SSc中)中，經(jīng)驗(yàn)公式為:(G+C)%=(tm-69.3)×2.442.溶液的離子強(qiáng)度。在離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中，TM較低。在純水中，DNA可以在室溫下變性。當(dāng)分子生物學(xué)研究需要核酸變性時(shí)，通常使用低離子強(qiáng)度的溶液。3.溶液的PH值。在高pH值下，堿被廣泛脫質(zhì)子，失去形成氫鍵的能力。當(dāng)pH值大于11.3時(shí)，DNA完全變性。當(dāng)pH值小于5時(shí)，DNA容易被嘌呤化。當(dāng)單鏈DNA電泳時(shí)，將氫氧化鈉添加到凝膠中以保持變性。4.變性劑。甲酰胺、尿素和甲醛會(huì)破壞氫鍵，阻礙堿積累，降低TM。這些變性劑通常用于單鏈DNA的電泳。Tm值一般指熔解溫度，熔解溫度（meltingtemperature，Tm）是指吸光值增加到最大值的一半時(shí)的溫度稱為DNA的解鏈溫度或熔點(diǎn)。