掃描電鏡樣品要求有形貌形態,要耐高真空、樣品表面不能含有有機油脂類污染物、樣品要是干燥的、樣品表面可以導電等等。
1、形貌形態,要耐高真空
掃描電鏡是靠電子束掃描物體表面來成像的??諝獾拇嬖跁沟碾娮邮冃?,影響掃描效果,所以被測樣品比較能耐高真空。
2、樣品表面不能含有有機油脂類污染物
油污在電子束作用下容易分解成碳氫化物,對真空環境造成很大污染。樣品表面細節被碳氫化合物遮蓋;碳氫化合物降低了成像信號產量;碳氫化合物吸附在電子束光路引起很大象散;碳氫化合物被吸附在探測器晶體表面,降低探測器效率。對低加速電壓的電子束干擾嚴重。
3、樣品要是干燥的
水蒸氣會加速電子槍陰極材料的揮發,從而很大降低燈絲壽命;水蒸氣會散射電子束,增加電子束能量分散,從而增加大的色差,降低分辨能力。
4、樣品表面可以導電
樣品表面要可以導電,如果不能導電,則要鍍金以增加導電性。在大多數情況下,初級電子束電荷數量都大于背散射電子和二次電子數量之和,因此多余的電子要導入地下,即樣品表面電位要保持在0電位。
樣品的初步處理方法:
1、取材
掃描電鏡來說,樣品可以稍大些,面積可達8mm×8mm,厚度可達5mm。對于掃描電鏡易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。
2、樣品的清洗
用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會遮蓋樣品的表面結構,影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。
3、固定
固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時間應適當延長。也可用快速冷凍固定。
4、脫水
樣品經漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。