牛血清白蛋白的提取操作步驟:
1、鹽析取離心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS(磷酸鹽緩沖生理鹽水)稀釋血清,搖勻后,逐滴加入pH7.2飽和硫酸銨溶液2mL,邊加邊搖,充分混勻,然后靜止放臵10分鐘,再離心(2000r/min)10min,將上清液傾入試管中。
2、取干凈的比色板,在各孔內滴加一滴納氏試劑?
3、取玻璃紙一張,折成袋形,將離心后的上清液倒入袋內,用線扎緊上口(注意要留有空隙),用玻璃棒懸在盛有半杯蒸餾水的100mL燒杯內,使透析袋下半部侵入水中,對蛋白液進行透析,常用玻璃棒攪拌袋外(燒杯中)液體,以縮短透析時間。
4、每隔2分鐘檢查一次,更換蒸餾水多次,用納氏試劑檢查袋外液體的NH4+,觀察顏色變化并記錄,直至袋內鹽分透析完畢。
5、將袋內液體傾入試管,即得牛血清白蛋白溶液。
牛血清白蛋白的鑒定方法:
1、點樣取一張膜條,將薄膜無光澤面向下,放入培養皿中的巴比妥緩沖液中使膜條充分浸透,取出,用干凈濾紙吸去多余的緩沖液,以薄膜的無光澤面距一端1.5㎝處做點樣線,將牛血清樣品與待測的牛血清白蛋白溶液分別用點樣器在同一張薄膜的點樣線處不同位置點樣。標準液點一次,待測液點三次。
2、電泳將點樣后的膜條致于電泳槽架上,放置時膜條無光澤面向下,點樣端致于陰極,待平衡5min后,打開電源,調節電源,調節電泳儀的電壓為160伏,通電60min,關閉電源后用鑷子將模條取出。
3、 染色將膜條直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中,染2分鐘后取出,立即浸于漂洗液中,分別在漂洗液1、2、3中各漂洗5min,直至背景漂洗干凈為止,用濾紙吸干薄膜。
4、鑒定比較樣品和待測液中白蛋白在薄膜上的電泳結果,看位置是否一致。
擴展資料:
牛血清白蛋白
牛血清中的簡單蛋白,是血液的主要成分(38g/1000ml),分子量68kD。等電點4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。
血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用。在動物細胞無血清培養中,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的一種球蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為66.430 Da,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用,例如在western blot中作為Blocking agent。
參考資料來源:?百度百科-牛血清白蛋白