因為在使用雙縮脲試劑時候是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液，再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液。若先加入硫酸銅[CuSO4]溶液，再加入氫氧化鈉[NaOH]溶液，則無法充分制造堿性環境。

CuSO4會與NaOH發生復分解反應，生成藍色氫氧化銅[Cu(OH)2]沉淀，導致現象不清，無法較好地達到實驗目的。

雙縮脲試劑的配制

雙縮脲試劑A是質量分數為0.1 g/mL的NaOH水溶液。

雙縮脲試劑B是質量分數為0.01 g/mL的CuSO4水溶液。

先在待測液中加入雙縮脲試劑A 3mL，振蕩均勻（營造堿性環境），再加入1～2滴雙縮脲試劑B，振蕩均勻。如果待測液里含有蛋白質，那么會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。

蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。

參考資料來源：百度百科-雙縮脲試劑