鐵離子的測定通常通過繪制校準曲線開始。首先，準備一系列不同濃度的鐵標準溶液，分別取0mL(空白),1.00mL,2.00mL,4.00mL,6.00mL,8.00mL,10.00mL鐵標準溶液0.1mg/mL于七個100mL容量瓶中。在每個容量瓶中加入約40mL的水，隨后加入50mL硫酸溶液(1+35)，調pH接近2。接著，加入3.0mL抗壞血酸溶液(20g/L)，10.0mL乙酸一乙酸鈉緩沖溶液(pH=4.5)，5.0mL鄰菲羅啉溶液(2g/L)。最后，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，室溫下放置15分鐘，用分光光度計于510nm處，以試劑空白調零測其吸光度。繪制出以測得的吸光度為縱坐標，對應的鐵含量(mg)為橫坐標的校準曲線。在實際樣品測定過程中，稱取約3g試樣(精確至0.01g)，置于250mL燒杯中，加入2mL鹽酸溶液及100mL水，加熱煮沸5分鐘。冷卻后，將樣品溶液全部移入500mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。從該溶液中用移液管吸取適量體積置于100mL容量瓶中，加水至約40mL，用氨水溶液(1+3)或硫酸溶液調pH接近2，加入3.0mL抗壞血酸溶液，10.0mL乙酸一乙酸鈉緩沖溶液，5.0mL鄰菲羅啉溶液。再次用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，室溫下放置15分鐘，用分光光度計于510nm處，以試劑空白調零測其吸光度。同時進行空白試驗以確保準確性。校準曲線的斜率和截距對于確定未知樣品中鐵離子的濃度至關重要。通過對比未知樣品的吸光度值與校準曲線上的對應值，可以準確計算出樣品中鐵離子的濃度。這一方法廣泛應用于環境監測、水質檢測以及食品分析等領域，有助于了解樣品中鐵含量的實際情況。值得注意的是，實驗過程中需嚴格控制pH值，避免引入額外的干擾因素。此外，抗壞血酸的存在可以防止鐵離子被氧化，從而確保測量結果的準確性。鄰菲羅啉是一種常用的顯色劑，它與鐵離子形成穩定的絡合物，使鐵離子的測定更加靈敏和可靠。實驗結束后，應妥善處理所有化學試劑和廢液，遵守實驗室安全規范，確保環境和人員安全。通過科學嚴謹的操作和數據分析，可以有效地檢測和定量鐵離子，為科學研究和實際應用提供可靠的數據支持。