蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時(shí)，其遷移速率受多種因素影響，包括電荷、分子大小和形狀等。通過(guò)在聚丙烯酰胺系統(tǒng)中添加陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉（SDS），大多數(shù)蛋白質(zhì)能與SDS結(jié)合形成復(fù)合物，每克蛋白質(zhì)結(jié)合1.4克SDS，這種復(fù)合物帶有相同密度的負(fù)電荷，其電荷量遠(yuǎn)超蛋白質(zhì)原有的電荷，從而消除了蛋白質(zhì)原有的電荷差異。在這種條件下，蛋白質(zhì)分子電泳的遷移率主要依賴于其分子量，而與蛋白質(zhì)所帶電荷無(wú)關(guān)。實(shí)際上，蛋白質(zhì)分子量的對(duì)數(shù)與電泳遷移率之間呈負(fù)相關(guān)。操作步驟包括凝膠制備：使用兩塊電泳玻璃板制成垂直板槽（確保不漏膠），垂直放置。將配制好的分離膠溶液倒入槽中，滴加無(wú)離子水，待凝膠凝固后，倒出無(wú)離子水，用吸水紙吸干，再倒入濃縮膠，插入梳子。上樣過(guò)程：取適量樣品，按1/1至1/5的比例加入5倍樣品緩沖液，沸水浴加熱3至5分鐘，待用。使用微量注射器吸取不超過(guò)30μl的樣品注入樣品槽。點(diǎn)樣后，調(diào)整電泳儀電流至10mA（2～3mA/em），保持電流穩(wěn)定，當(dāng)溴酚藍(lán)遷移至離分離膠底部1～2cm時(shí)，停止電泳。染色步驟：電泳結(jié)束后，取出凝膠板，浸入染色液中，在37℃溫箱中保溫過(guò)夜。24小時(shí)后，即可觀察到清晰的蛋白質(zhì)條帶。需要注意的是，電泳過(guò)程中電流的穩(wěn)定對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要，不當(dāng)?shù)牟僮骺赡軐?dǎo)致電泳遷移率的偏差。因此，在操作過(guò)程中應(yīng)密切關(guān)注電流變化，確保其穩(wěn)定。此外，染色液的選擇也會(huì)影響蛋白質(zhì)條帶的清晰度，通常選擇含有考馬斯亮藍(lán)或銀染的染色液，以獲得最佳的檢測(cè)效果。SDS-PAGE是一種廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分子量測(cè)定和分離的技術(shù)。通過(guò)精確控制實(shí)驗(yàn)條件，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同分子量蛋白質(zhì)的高效分離和準(zhǔn)確定量。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究、蛋白質(zhì)組學(xué)分析以及藥物篩選等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。值得注意的是，SDS-PAGE不僅用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定，還能通過(guò)分析蛋白質(zhì)遷移率的變化，提供有關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的信息。這種技術(shù)的廣泛應(yīng)用使得它成為現(xiàn)代生物科學(xué)研究不可或缺的工具之一。