熒光光譜中的激發波長確定是一項關鍵的技術步驟。如果實驗室設備配備了三維掃描功能，操作相對簡便，按照儀器說明書上的指導進行設置即可。然而，對于不具備這種功能的設備，需要采用其他方法來確定。通常，可以將激發波長（EX）設定為200納米，然后在210至800納米范圍內掃描發射波長（EM），記錄下所有出現的峰值波長。接著，調整激發波長再次進行掃描，觀察發射圖譜中峰的位置變化。如果某個（或某些）峰的位置在不同激發波長下基本保持不變或變化很小，這些峰通常被認為是熒光峰。這是因為熒光峰的位置不會隨著激發波長的變化而變化，只是峰高或峰面積有所調整。一旦確定了熒光峰的波長，應當將其作為發射波長（EM）固定下來，并進行激發波長（EX）的掃描，此時激發波長的范圍應該小于發射波長，以符合斯托克斯位移定律。如果掃描后僅出現一個峰，則可以很容易地確定下來，再次固定這個波長重新進行發射波長的掃描，可以獲得較好的信噪比結果。如果掃描后出現多個峰，就需要依賴操作者的經驗和判斷，選擇峰形高度適宜并且具有一定帶寬的峰作為激發波長。這種選擇有助于提高實驗的準確性和可靠性。確定激發波長的過程需要細致的操作和精確的儀器設置，以確保熒光光譜的準確性和有效性。通過上述方法，可以有效地識別和確認熒光峰的位置，從而為后續的熒光光譜分析提供重要的基礎數據。