在HE染色過程中，分化、漂洗和復染是關鍵步驟，直接影響染色效果。分化的主要目的是褪去細胞質中的染色，使細胞核更加鮮明。將切片浸入1%鹽酸乙醇液中，持續數秒至數十秒，直至切片顏色變紅且顏色較淺即可。若染色效果不佳，分化步驟不可或缺；若染色適中，則可以省略此步驟。漂洗則是將切片放入自來水中，使切片恢復藍色。低倍鏡檢查時，細胞核應呈現藍色，結構清晰；細胞質或結締組織纖維成分應無色。之后，切片再放入蒸餾水中漂洗一次，確保切片完全干燥。復染步驟中，使用0.5%伊紅乙醇液對比染色2至5分鐘。伊紅主要染細胞質，其著色濃淡需與蘇木精染細胞核的濃淡相協調。細胞核染色較濃時，細胞質也應濃染；細胞核染色較淺時，細胞質也應淡染。若需要，可在伊紅乙醇液中加入數滴冰醋酸，以助細胞質著色，并防止染色經乙醇脫水時褪色。通過上述步驟，可以確保染色效果統一且鮮明，提高病理圖片的清晰度和準確性。