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細胞知識點10:細胞及生物大分子的動態變化

導讀單分子技術則是一種在細胞內實時觀測單一生物分子運動規律的技術,能在納米空間尺度和毫秒時間尺度上精確測量單分子的距離、位置、指向、分布、結構及其動態過程。這項技術涵蓋了分子馬達、核酸馬達、細胞信號通路、細胞器、細胞骨架、染色質分布,以及細胞的分裂、遷移、胞吞、胞吐等過程,特別是在蛋白質和 DNA 的單分子力學測量方面有著廣泛應用。酵母雙雜交技術是一種基于真核生物酵母體內分析蛋白質-蛋白質相互作用的系統。它通過構建攜帶 DNA 結合域(BD)和轉錄激活域(AD)的融合蛋白,以及與可能相互作用蛋白的融合蛋白,在細胞內表達,從而驗證特定蛋白之間的相互作用。這一技術具有高靈敏度、快速、直接的優點,廣泛應用于細胞信號轉導網絡中各種蛋白質關系的研究。

熒光漂白恢復(FPR)技術是一種在活體細胞中檢測特定分子運動和遷移速率的先進方法。它通過使用熒光分子與蛋白或脂質偶聯,利用高能激光束照射細胞特定區域,造成該區域熒光分子的不可逆淬滅,即光漂白。隨后,由于細胞內部脂質或蛋白質的動態運動,周圍未漂白區域的熒光分子不斷向光漂白區遷移,導致光漂白區域的熒光強度逐漸恢復至初始水平。這一技術能提供活細胞中脂質或蛋白質運動的定性結果,同時還能獲取定量信息,有助于解決細胞內分子動態變化問題以及它們與其他成分的相互作用。單分子技術則是一種在細胞內實時觀測單一生物分子運動規律的技術,能在納米空間尺度和毫秒時間尺度上精確測量單分子的距離、位置、指向、分布、結構及其動態過程。這項技術涵蓋了分子馬達、核酸馬達、細胞信號通路、細胞器、細胞骨架、染色質分布,以及細胞的分裂、遷移、胞吞、胞吐等過程,特別是在蛋白質和 DNA 的單分子力學測量方面有著廣泛應用。酵母雙雜交技術是一種基于真核生物酵母體內分析蛋白質-蛋白質相互作用的系統。它通過構建攜帶 DNA 結合域(BD)和轉錄激活域(AD)的融合蛋白,以及與可能相互作用蛋白的融合蛋白,在細胞內表達,從而驗證特定蛋白之間的相互作用。這一技術具有高靈敏度、快速、直接的優點,廣泛應用于細胞信號轉導網絡中各種蛋白質關系的研究。FRET(熒光共振能量轉移)技術則是一種基于熒光分子間能量轉移的分子相互作用檢測方法。當兩個發光基團之間的距離在一定范圍內時,供體分子的熒光會被受體分子吸收并轉化為特定波長的熒光,以此來判斷兩個蛋白質分子之間的直接相互作用。FRET技術特別適用于檢測活細胞內蛋白質間的相互作用。放射自顯影技術是一種利用放射性同位素的電離射線對乳膠的感光作用,對細胞內生物大分子進行定性、定位與半定量研究的細胞化學技術。通過摻入同位素標記的生物大分子前體,顯示細胞內同位素所在位置,從而對細胞或生物體內生物大分子進行動態研究和追蹤。舉例而言,在研究 DNA、RNA 合成或含硫蛋白分子代謝時,常使用特定的同位素標記前體進行研究。

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