開機順序：先開電腦，待電腦完全啟動后再開啟定量PCR儀主機，等主機面板 上的綠燈亮后即可打開定量PCR的收集軟件，進行實驗。

關機順序：確認實驗已經結束后，首先關閉信號收集軟件，然后關掉定量PCR儀主機的電源，最后關閉電腦。

實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。

原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設定域值水平，這就是分析熒光數據的水平。

擴展資料

主要操作流程：

1、針對目的基因序列選擇合適的擴增片斷，設計引物。DNA引物長度：15-25 個堿基GC含量：50%左右如果引物的與AT區域富集結合，可以考慮用LNA替換幾個堿基，較少引物的長度以及避免引物次級結構和3’端二聚體的影響.由于引物和模板和探針與靶點之間的分之間的相互競爭，分之內雜交。

倒轉重復等等會引起引物的引發探針對結合效率達降低，因此我們選擇引物二聚體的△G為負值，即：<10 kcal/mol.沒有連續的G/C。引物探針的保存一般遵循以下原則：正向和反向引物保存在-20度，濃度為10mM 或者10×工作濃度.探針應該避光保存，貯存在-70度，最好以凍干粉狀態，工作濃度的液體保存一般兩周左右。

2、輸入靶序列，用進行比對；

3、檢查比對序列的多態性以及可能的錯誤避免這些區域來進行引物和探針設計；

4、在靶序列中避免直接待重復區，在重復區進行雜交容易使得引物非獲得產物性結合，降低DNA的擴增效率以及減少分析的靈敏度；

5、考慮到潛在的剪接變異體以及合適的所需要的獲得到靶，通過學分析內含子以及外顯子的邊界，主要通過cDNA和基因組序列比對來確定。一般都設計跨最長內含子區，這樣減少了擴增子受到基因組DNA的污染的影響。這是十分有必要的，特別當用DNA做歸一化處理以及靶向某一特異的剪接變異體。

最經濟的做法是讓下游引物跨越剪接接頭，這樣允許使用一條探針檢測可能剪接變異體.然后如果在有效性和靈敏度無法保證情況下，可以使用跨越單一外顯子的設計方案。我們還是建議試驗者用DnaseI處理樣品，除去gDNA的污染；

6、在RT步驟時，用工具檢測在特定溫度下靶序列的折疊情況，避免一些高度次級結構的區域，那些區域探針和引物結合效率較低。

參考資料來源：百度百科-實時熒光定量pcr儀

參考資料來源：百度百科-定量PCR