制備過程開始于將凍存的菌種按1:100的比例接種于3ml的LB液體培養基中，并在37℃條件下使用搖床進行過夜震蕩培養。接下來，取1ml活化后的菌種接種到100ml的LB培養基中，繼續在37℃搖床下培養1.5-2小時。隨后，將菌種置于冰上10分鐘，然后在4℃條件下以4000rpm的轉速離心10分鐘收集菌體。棄去上清后，使用事先冰浴處理過的0.1mol/L CaCl2溶液重新懸浮細胞，并在冰浴中靜置30分鐘。再次收集菌體，重復上述離心步驟。接著，在冰浴條件下加入0.1mol/L CaCl2溶液，隨后將混合物分裝保存，每份感受態細胞中加入40%甘油，使甘油終濃度達到20%。轉化過程包括將連接產物加入感受態細胞中，在冰上放置30分鐘，隨后在42℃條件下加熱90秒，之后在冰上放置2-5分鐘。最后，將轉化產物涂布在選擇性培養基上進行篩選。對于細胞轉染，這里以脂質體轉染為例，使用六孔板進行操作。首先，在每個孔中加入200ul OPTI和5ul Lipofectin，靜置5分鐘。接著，向另一個孔中加入200ul OPTI和4ug質粒DNA，靜置20分鐘后將兩部分混合。將混合液加入孔板中，4-6小時后更換培養基。值得注意的是，如果使用電轉或病毒侵染進行轉染，具體操作步驟可能會有所不同。在進行這些操作時，請確保遵循實驗室安全規范，以保障實驗人員的安全。詳情