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不可用于實時監測化學反應、實時監測生物過程和實時監測環境過程。1、實時監測化學反應:實時熒光PCR儀能夠實時監測PCR反應過程中熒光信號的累積,并不能用于實時監測其余類型的化學反應,這需要針對每種反應定制專門的熒光探針,而且這種探針的制備和篩選過程非常復雜。2、實時監測生物過程:實時熒光PCR儀也不能用于實時監測生物過程,如細胞增殖、蛋白質表達等。該類過程涉及到的分子數量龐大,且相互作用非常復雜,很難通過單一的熒光信號來準確反映。3、實時監測環境過程:實時熒光PCR儀同樣不能用于實時監測環境過程,土壤微生物活動、水體富營養化等。該類過程涉及到的分子種類繁多,且相互作用非常復雜,很難通過單一的熒光信號來準確反映。