福爾根染色對(duì)于DNA的觀察至關(guān)重要,其效果受多種因素影響。首先,對(duì)照切片在Schiff試劑中的處理時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),一般建議控制在1小時(shí)內(nèi),甚至0.5小時(shí)更為理想,否則試劑的酸性會(huì)促使DNA水解,導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。這是因?yàn)檫^(guò)長(zhǎng)時(shí)間的暴露會(huì)導(dǎo)致DNA結(jié)構(gòu)被破壞,影響染色的準(zhǔn)確性。
其次,反應(yīng)的深淺與多個(gè)條件密切相關(guān)。水解時(shí)間的設(shè)定需根據(jù)所使用的固定液和樣本特性來(lái)調(diào)整。如果時(shí)間過(guò)短,游離的醛基數(shù)量不足,染色效果可能不明顯;然而,如果水解時(shí)間過(guò)長(zhǎng),醛基會(huì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì),同樣會(huì)導(dǎo)致染色效果減弱。因此,精確控制水解的時(shí)間和溫度至關(guān)重要。
福爾根反應(yīng)的原理是,DNA在弱酸環(huán)境下水解,釋放出的嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵斷裂,形成游離的醛基。這些醛基與Schiff試劑結(jié)合,產(chǎn)生紫紅色化合物,使得含有DNA的細(xì)胞區(qū)域呈現(xiàn)鮮明的紫紅色陽(yáng)性反應(yīng)。這個(gè)過(guò)程要求操作者對(duì)時(shí)間、溫度的把控精細(xì),以確保染色結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。