半定量rt-pcr參照的做法一般有兩種：1)將要比較的兩個樣品的beta-actin調成一樣的亮度，然后就可以直接比較目的基因的亮度了。方法的結果比較直觀，但較費事。2)不進行調平，一個樣品里將目的基因和beta-actin直接比較，用軟件就可以做到，然后將不同樣品的這個比值進行比較就可以了。方法比較簡單，但結果不夠直觀。1.每個標本都要做自己的內參，不能用同一個內參！2.每個標本在實際做前都要摸最佳循環數，包括內參，但內參的循環數不一定要和目的基因一樣，都要選擇上升期的中間數作為最佳循環數，否則進入平臺期就沒有可比性了！所以內參要有它自己的最佳循環數！3.電泳掃描后，計算灰度值，先用同一標本的內參和目的進行比較，然后用這個相對值再去和其他你所要比較的平行組進行比較，一般每組4個樣本以上。這樣就可以知道各組之間的差別了！