培養(yǎng)基的滅菌是保證發(fā)酵生產(chǎn)無菌環(huán)境的重要步驟。母種培養(yǎng)基滅菌通常采用高壓鍋，每瓶培養(yǎng)基應(yīng)扎成一捆，并用防潮紙包裹棉塞，防止滅菌過程中潮濕。高壓鍋內(nèi)水位需控制在適當(dāng)位置，過少或過多都會影響滅菌效果。滅菌時間應(yīng)根據(jù)壓力設(shè)定，一般在1.2kg～1.5kg/cm2下保持15～20分鐘。在使用高壓鍋滅菌時，需注意排除鍋內(nèi)的冷空氣，可通過關(guān)閉排氣閥后升火或打開排氣閥釋放冷氣兩種方法實(shí)現(xiàn)。滅菌時間不宜過長或過短，過長會導(dǎo)致養(yǎng)分破壞，過短則滅菌不徹底。滅菌結(jié)束后，放氣速度應(yīng)緩慢，以避免棉塞被沖出。若無高壓鍋，可采用土蒸汽鍋滅菌，但需延長滅菌時間。間歇滅菌法也可用于母種培養(yǎng)基的滅菌，即每天蒸煮1小時，連續(xù)三天。滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)立即取出，直立放置2～3分鐘，待試管壁上的水珠回到培養(yǎng)基內(nèi)，再擱置斜面。原種、栽培種的滅菌則需使用較大滅菌鍋。采用高壓蒸汽鍋滅菌時，應(yīng)逐漸加大火力，以防止溫差過大導(dǎo)致瓶子破裂。滅菌時間根據(jù)培養(yǎng)基原料種類和生熟程度調(diào)整，如木屑、棉殼等需1.5kg/cm2壓力下60分鐘，稻草、糞草培養(yǎng)基需90分鐘，麥粒培養(yǎng)基則需120分鐘。土鍋滅菌時，在98℃～100℃下需連續(xù)滅菌6～8小時，麥粒培養(yǎng)基需12小時。塑料薄膜袋裝菌種培養(yǎng)基可采用常壓滅菌，100℃保持8～12小時，聚丙烯塑料薄膜可在1.5kg/cm2壓力下保持2小時，滅菌徹底且不會破裂。滅菌完畢后，培養(yǎng)基應(yīng)放置于清潔、涼爽、干燥的室內(nèi)冷卻待接，并在棉塞上噴灑5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液，以防雜菌感染。