基因工程的第一步是獲取目的基因，這可以通過PCR技術或者直接合成來實現。PCR技術能夠從原始DNA樣本中放大目標片段，而直接合成則是通過化學方法生成所需的DNA序列。第二步是構建表達載體，這是將目的基因連接到一個已經非常了解其序列并且在受體細胞中穩定遺傳的載體上。這個過程通常需要使用連接酶來將目的基因連接到載體的特定位置。隨后的第三步是將載體導入受體細胞，這一步驟通常被稱為轉化。具體操作包括將連接產物與感受態細胞混合，然后在冰浴中進行一段時間，接著進行熱休克處理，之后將細胞放入LB或SOC培養基中復蘇。最后，將這些細胞涂布到含有抗性標記的抗生素平板上，只有成功導入目的基因的細胞才能存活下來。第四步是目的基因的檢測與表達，根據實驗的具體目的，可以選擇合適的方法來進行檢測。這可能包括分子生物學技術如Southern雜交、Northern雜交、Western雜交等，或者通過分析細胞或組織中的蛋白質表達水平來驗證目的基因是否被成功表達。