熱原注入人體后，即使劑量僅為1μg/kg，也有可能引發不良反應，如發熱、寒顫、惡心、嘔吐等癥狀。在注射后一小時內，這些癥狀通常會出現，嚴重者甚至可能陷入昏迷、虛脫，若不及時救治，甚至可能危及生命。這一現象被稱為熱原反應。熱原本身沒有明確的劑量概念。根據《中國藥典》2005年版的規定，熱原檢測通常采用家兔法。這種方法基于家兔對熱原反應與人類相似的特點。在檢測過程中，會將一定量的供試品注入家兔體內，觀察其體溫變化，以此判斷供試品中熱原的含量是否符合標準。然而，該方法操作復雜，耗時較長，不適合注射劑生產過程中的即時質量控制。此外，家兔法不適用于放射性藥物、腫瘤抑制劑等細胞毒性藥物。另一種檢測熱原的方法是細菌內毒素檢查，它利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素。細菌內毒素的量以內毒素單位（EU）表示。細菌內毒素檢查有兩種方法：凝膠法和光度測定法。凝膠法則通過鱟試劑與細菌內毒素的凝集反應來檢測或半定量內毒素；光度測定法則通過檢測反應過程中濁度變化或特定底物釋放的呈色團數量來測定內毒素。細菌內毒素檢查法的靈敏度為0.0001μg/ml，比家兔法高10倍，且操作簡便、成本較低，適合用于注射劑生產過程中的熱原控制。然而，這種方法僅對革蘭陰性菌產生的內毒素敏感，對其他類型的內毒素不敏感，因此目前仍無法完全取代家兔法。