4. 通過反轉錄酶的作用，以mRNA為模板在體外合成cDNA，然后將其與適當的載體連接并轉化受體菌。這樣，每個細菌都會含有一段特定的cDNA，并且可以繁殖擴增。這樣構建的cDNA文庫包含了細胞全部的mRNA信息。原核生物由于缺乏POLYA尾，通常不易進行反轉錄。5. Mut+菌株能夠快速利用甲醇作為碳源，而Muts菌株則不能。因此，Mut+菌株在含有甲醇的MM平板上能夠快速生長，而Muts菌株僅能在含有葡萄糖的MD平板上快速生長。6. 切口平移法（nick translation）利用大腸桿菌DNA聚合酶I的多種酶促活性，將標記的dNTP摻入新合成的DNA鏈中，從而產生均勻標記的高活性DNA探針。操作步驟如下： （1）取1ug DNA溶解于少量無菌雙蒸水中，加入5ul 10×切口平移緩沖液（成分：0.5mol/L Tris-HCl，pH 7.2；0.1mol/L MgSO4；1mmol/L DTT；500mg/mL牛血清白蛋白），再加入除標記物（如?-32P-dATP）外的其他三種dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）的20mmol/L溶液各1ul。 （2）加入100ul標記物溶液，用無菌雙蒸水補至總體積46.5ul，混勻后加入0.5ul稀釋的DNaseI溶液，再次混勻；接著加入1ul（約5單位）的大腸桿菌DNA聚合酶I，混勻。 （3）在14-16℃下反應1-2小時。