一、母種制作技術通常處于保存期的大球蓋菇菌種，其菌絲處于緩慢生長或停止生產狀態。因此，在制作生產用母種之前，必須對保存的菌種進行復壯，以確保處于旺盛生長狀態的菌種能夠接入母種或原種培養基上，從而促進菌絲快速生長，獲得粗壯、濃白、生長勢旺的菌種。1. 培養基配方- I號：PDA（馬鈴薯200g、葡萄糖18g、瓊脂18g、水1000ml）- Ⅱ號：PDA+硫酸鎂1.5g+磷酸二氫鉀3g+蛋白胨2g、水1000ml- Ⅲ號：馬鈴薯100g、干雜木屑100g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000ml上述培養基配方需經高壓滅菌20分鐘后制成試管斜面，且3天內使用完畢。2. 制作方法通過組織分離技術，將選定的大球蓋菇組織塊接入I號培養基上（或接入需復壯的保存種）。在24-28℃條件下培養10-15天，當菌絲長至試管的1/3-1/4時，挑選菌絲擴展前端濃密、粗壯的部分轉入Ⅱ號或Ⅲ號培養基上。采用兩點接種法，使菌絲迅速長滿培養基表面（一般15-20天），從而提高菌絲質量。經過Ⅱ號、Ⅲ號復壯培養基培養的菌絲表現為濃白、粗壯、生命力強，有利于原種菌絲的生長，縮短原種培養時間，提高成品率。二、原種及生產種制作1. 配方- I號：小麥或大麥88%、米糠或麥麩10%、石膏或碳酸鈣1%、石灰0.5%、含水量65%（加入米糠或麩皮主要是使培養基疏松，增加透氣性，菌絲走向好）- Ⅱ號：小麥25%、稻草64%、麥麩10%、石膏粉1%、含水量65%-70%- Ⅲ號：雜木屑42%、雜刨木花42%、米糠或麥麩15%、硫酸鎂0.2%、石膏或碳酸鈣1%、含水量70%以上配方在1.3-1.5kg/平方米壓力下，消毒2-2.5小時，3天內使用完畢。2. 原料選擇和配制實踐證明，制作大球蓋菇原種和生產種的最佳培養基主原料是麥粒，其次是木屑、刨木花，稻草最差。- （1）麥粒的選擇：應選擇深黃或暗紅色皮韌性大、浸泡時不易破皮的麥粒。從吸水率來看，大麥優于小麥。- （2）浸泡：浸泡分為石灰水浸泡和清水浸泡預煮后加石灰兩種方法。前者使用1%石灰水浸泡，pH值9-10，在25℃下浸泡8-9小時（大麥9-10小時），夏季水溫高時應適當縮短時間。浸泡好的麥粒應具有較強彈性，指甲印很快消失。后者使用清水浸泡麥粒，時間與前者相同。浸泡后的麥粒需用清水沖洗后瀝干，放入鍋內煮至剛沸為止，然后冷卻至室溫，加入適量石灰調pH至6.5左右，含水量保持在65%。- （3）裝瓶及消毒：選用容積700ml，瓶口內徑為3cm左右的淺白色耐高溫玻璃瓶。將配好并混勻的培養料裝入瓶中，每瓶裝200-300g為宜。在1.3-1.5kg/平方米壓力下進行消毒，時間為2-2.5小時。消毒時注意不要讓麥粒呈糊狀，以免影響透氣性和養分，從而影響菌絲生長。- （4）接種和培養：采取多點式接種，在瓶內培養料四周按適當距離接種3-4點，料面上再接種小塊菌種。在24-28℃條件下暗培養7-10天，直至菌絲萌發生長至直徑約4cm的菌斑時，立即對菌絲進行人工攪拌。攪拌時接種點的菌絲被攪斷受刺激，同時開瓶口（在超凈臺上進行）實際上給菌絲提供了增氧作用，有利于菌絲迅速生長。一般整個培養過程需25-30天可長滿瓶。3. 生產種制作- （1）配方、培養基制作、瓶子選擇和消毒與原種相同。- （2）接種：將長滿瓶的原種接種到生產培養基表面上，盡量鋪滿料面，以避免雜菌污染。每瓶原種接不超過30瓶生產種。在24-28℃條件下培養7-10天，直至菌絲萌發生長至潔白、濃密粗壯時，對菌絲進行人工攪拌，攪斷菌絲，刺激其快速生長。一般20-25天可長滿全瓶。