1、五步蛇的柄息環境為陸生，但也有少數為樹棲，不同種類蛇的棲息環境也有差異。五步蛇主要棲息在海拔400-700米的常綠和落葉混交林中，夏季喜歡在山塢的水溝一帶活動，它們通常會選擇在陰涼通風有樹有水的地方生活，也在茶園、農田、柴堆內活動，能上樹，也能進入人房。冬季多在樹根形成的天然洞或舊鼠洞中越冬。

2、五步蛇年活動周期從驚蜇至大雪約為9個月，影響活動的主要因素為溫度、濕度及食物。氣溫20-30℃時，活動最頻繁，氣溫高達35-38℃時，多向水邊集中。

3、野外的五步蛇通常以社鼠、犬足鼠、黃鼬及棘胸蛙為食。五步蛇在山塢的分布，和棘胸蛙的分布、數量有關系。因為會進入人房，所以也會以黃胸鼠為食。

4、繁殖期間雌蛇尾基部的臭腺分泌物有特殊臭味，以此來引誘雄蛇。交配前有追偶現象，交配時相互纏繞。要注意的是蛇交配時其性情要比平時暴躁，這時若遇外面的驚擾，會發出猛烈的攻擊。多數母蛇會將卵產于天然的洞穴之中，洞道淺短干燥。產卵數目多少不等，年輕母蛇產卵早但數量少，年老母蛇產卵遲但數量多，一般為12-18枚。

5、五步蛇的冬眠期從大雪至翌年驚蟄約為3個月，越冬洞穴較深，蛇多時大小蛇在一起，有時也和蝮蛇混居在同一洞中。當氣溫為8℃時與蛇體表溫度相等，當氣溫高于8℃時蛇體表溫度始終比氣溫略低1℃，當氣溫低于8℃時蛇體表溫度則較氣溫略高于1℃，蛇體表溫度為11℃以上時能咬人。人工飼養的幼蛇，當氣溫低于17℃時盤瞳不動，在12℃時觸動它們則會表現出張口欲咬人的狀態。